實驗規范操作知識
l 重要性:(1)出于安全考慮
(2)實驗結果的準確性、可靠性、可重復性
l 規范操作貫穿整個實驗過程:
①準備實驗。做實驗要事先安排,要有計劃。首先要查閱文獻,擬定實驗方案,接下去準備藥品和所用到的儀器。
注意所用藥品(提前把藥品的基本信息查詢*,包括熔沸點,溶解性,毒性?用后如何處置等)實驗室有無,擺放位置?這個實驗可能要用到哪些玻璃儀器?這些玻璃儀器實驗室是否都有?數量夠不夠?干凈不?是否要烘干?注意!提前把藥品儀器都找好,放置在一個固定的位置備用。對于一些公用實驗儀器,要提前協商解決使用。
②實驗過程。玻璃儀器使用前,再次檢查有無破損。根據實驗設計取用藥品,開始實驗。實驗過程,人不能長時間離開操作現場,尤其是加熱溫度高的實驗等。注意觀察實驗過程出現的現象,并及時做好記錄,并根據出現的現象及時調整自己的實驗方案等。
③實驗結束后,及時處理實驗。如確實來不及處理,要加注標簽,以免與別人的樣品搞混淆或者被別人不小心倒掉,并在實驗記錄本上如實寫明情況。注意實驗臺面的整潔,玻璃儀器的清洗,及時烘干。
尤其是一些公用的儀器,不要長時間占用而不及時處理干凈或清洗。公用的藥品用后要及時歸位。
④實驗結果的分析與總結。實驗結束后,及時對實驗結果進行分析,如遇到問題自己無法解決時,可向有經驗的師兄師姐請教,仍不能妥善解決,及時與指導老師協商,規劃下一步的實驗。定期對實驗結果進行階段性總結,這樣易于發現問題,并能總結出規律,有利于下一步實驗。
1.超聲波使用
超聲波的功能:
加速溶解
清洗儀器
超聲脫氣脫出溶劑中的氣泡,使HPLC檢測時基線平穩。
注意事項:
①首先要檢查瓶子是否破損,瓶子在超聲波中要放置平穩,免得液體傾出。
②超聲波水深要合適,不宜長時間使用,注意中間的停止。
③水的定期更換。
2.恒溫水浴的使用:
①加熱水浴的水要蓋過物料
②瓶子要與冷凝管相匹配
③冷凝水的問題:水流合適,橡皮管的牢固,檢查是否有老化?大小可匹配?是否接錯?
④下水管的放置,注意一定要放到水槽中,zui后對準下水管口。一定要放穩,不要讓水漏到地板上,切忌!
3.旋轉蒸發儀
(濃縮):主要用于在減壓條件下連續蒸餾大量易揮發性溶劑。須與循環水泵(右圖)相連接
旋轉蒸發儀和循環水泵的各個接口的磨合,注意潤滑和密封,真空管定期檢查與更換,否則真空達不到要求。
如真空抽不上來或真空度變小需檢查:
(1) 各接頭,接口是否密封
(2) 密封圈,密封面是否磨損太嚴重,還是否有效
(3) 主軸與密封圈之間真空脂是否涂好
(4) 真空泵及其皮管是否漏氣
(5) 玻璃件是否有裂縫、碎裂、損壞的現象
濃縮過程需要注意以下問題:
①不要裝太多,要求不超過1/2,否則易暴沸,污染。
②剛開始不要轉太快,否則真空達不到瓶子易脫落。
③濃縮過程一般先抽真空再升溫,并注意及時放氣,減少暴沸。酒精與水混合液在濃縮時特別容易暴沸
④濃縮完成關泵時,注意先卸真空,再關閉水泵的電源,切忌順序顛倒造成倒吸。在卸真空時注意保護瓶子(尤其是大的,重的瓶子)不要掉入水中。循環水泵一般有兩個抽氣口,所以關泵時要觀察另一抽氣口是否在使用?卸去瓶子時也要注意水浴高度,不合適時要先降低水位,否則瓶口蘸水或者瓶子與水浴鍋碰撞,損壞玻璃瓶污染樣品。
⑤注意水浴鍋中水的更換以及循環水泵的水更換。循環水泵的水建議每周更換一次,使用頻率高時更換水的周期也要變短?;蛘邔⒗淠隹谂c循環水泵連接,實現循環水泵中水的適時更換。
4. 抽濾裝置的使用:與循環水泵連接
HPLC所用溶劑的過濾與脫氣:過濾除去一些顆粒狀的雜質,使用微孔濾膜,孔徑0.45um和0.22um,分為水相膜和油相膜。
減壓抽濾溶劑注意事項?抽濾瓶,先檢查一下可有破損?對齊才不會漏液?不能倒吸?嚴禁抽濾溶劑時操作者長時間離開工作現場,使得真空泵長時間空抽,減短其壽命。
5.電子天平的使用
①精密儀器,到小數點后三位(左圖,上海良平)或四五位(右圖,梅特勒)。已調水平,嚴禁隨意搬動。
②注意天平的量程。一般天平上都有一個max, min。
③注意清潔。固體樣品用稱量紙,注意不要灑到稱量盤上,尤其是一些具有腐蝕性的樣品,稱取時尤其得小心。若要灑落,關閉天平電源,輕輕取出托盤,用軟紙及時將灑落到縫隙的物品清理掉,必要時用棉球蘸無水乙醇擦拭。液體樣品稱取時尤其要注意,一定不要灑到托盤、開關門的縫隙處或液晶顯示屏上。如果腐蝕,會造成天平稱量不準確,門關不上或者開關門時很困難。天平使用一段時間后,要用隨機帶的校準砝碼進行校正,以保證稱量準確。
④用完后及時清理。這個清理工作包括廢棄的稱量紙、天平周圍灑落物的處理、藥勺上剩余物品的清理。必要時要將藥勺清洗,無機鹽類用水沖洗基本就可以,有機藥品用相應的有機溶劑洗滌,藥勺及時洗干凈,放回原來的位置。
6. 烘箱使用
烘樣品:①注意溫度的設定,對于所烘樣品有特殊要求的,易高溫變質的樣品,必須等烘箱溫度穩定后再放入。否則在烘箱升溫時,會有部分時間超過設定溫度5~10度。
②盡量白天烘樣品,避免過夜。高溫烘樣品時要注意及時查看是否有異常情況。
③要用培養皿或燒杯盛裝,嚴禁樣品過滿,注意放水平,尤其是一些浸膏或粘稠物。
烘儀器:①清洗干凈的玻璃儀器,先瀝干大部分水后,再送入烘箱進行烘干。
②烘儀器時去掉橡皮筋,橡膠塞等,盡量去掉標簽紙
③先放滿上層,再放下層。下層有干儀器時,須先取出,再往上層堆放潮濕儀器,否則下層干儀器易被潮濕儀器的水珠炸裂。
7.冰箱的合理使用
用途:存放一些需低溫冷藏或冷凍的藥品或個人制作的樣品,如生物樣品等。
存放樣品注意事項:
(1)不要隨便什么藥品或樣品都往冰箱放,(這是錯誤的觀念:樣品存在冰箱就比室溫下更易貯存等)有必要存放時再使用。擺放整齊、平穩,切忌隨意的順手堆放,冰箱門輕開輕關,否則大的震動易門柜上存放的液體樣品傾斜或傾出,污染冰箱或他人樣品。
(2)存放樣品記得貼標簽,注明樣品為何人的?編號及盛裝何物?尤其對于個人制作的重要樣品,務必注意標簽紙再用塑料膠帶纏繞,否則樣品反復凍融易造成標簽脫落、字跡模糊等情況。
(3)樣品如對潮濕的水汽較敏感,注意瓶子封口處用防水膠帶仔細纏繞,使其盡量隔絕水汽等。
(4)個人樣品定期清理,及時處理掉無用樣品。對于別人樣品,未經許可勿隨意拿出,搬動、任意丟棄等。